Laboratorio di biologia molecolare (2019/2020)



Codice insegnamento
4S01911
Crediti
6
Coordinatore
Stefano Capaldi
Settore disciplinare
BIO/11 - BIOLOGIA MOLECOLARE
Lingua di erogazione
Italiano
L'insegnamento è organizzato come segue:
Attività Crediti Periodo Docenti Orario
Teoria 2 II semestre Stefano Capaldi

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Laboratorio [II turno] 4 II semestre Matteo Ballottari

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Laboratorio [I turno] 4 II semestre Stefano Capaldi

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Obiettivi formativi

L’obiettivo primario del corso è rappresentato dall’apprendimento delle metodologie necessarie allo svolgimento delle più comuni pratiche di manipolazione del DNA. In particolare gli studenti apprende-ranno le principali tecniche di purificazione degli acidi nucleici, la loro separazione mediante elettrofo-resi, l'amplificazione del DNA e le metodologie per clonaggio in vettori batterici.
Nelle esercitazioni pratiche è prevista l'applicazione delle principali tecniche di purificazione del DNA plasmidico e genomico, la separazione del DNA mediante elettroforesi su gel di agarosio, la sua di-gestione con enzimi di restrizione, la preparazione di costrutti genici e la loro trasformazione in E. coli.
Al termine del corso lo studente avrà appreso le nozioni basilari riguardanti la manipolazione del ma-teriale genetico e sarà in grado di utilizzare le principali tecniche di laboratorio per il clonaggio di geni.

Programma

Teoria:
Il DNA ricombinate. Clonaggio di Geni.
Vettori batterici e non batterici. Librerie genomiche e di cDNA.
Manipolazione degli acidi nucleici. Digestione con endonucleasi di restrizione. Elettroforesi. Ligazione del DNA.
Reazione a Catena della Polimerasi (PCR). Applicazioni
Colutre batteriche. Trasformazione di cellule batteriche ed eucatriotiche.
Produzione di proteine da geni clonati.

Esercitazioni di Laboratorio:
Purificazione di DNA plasmidico
Purificazione di DNA genomico
Purificazione di RNA
Elettroforesi e purificazione del DNA da gel
Digestione con enzimi di restrizione
PCR e purificazione dell'amplicone
Trasformazione, colony PCR
Espressione di una proteina ricombinante e analisi mediante SDS PAGE e Western Blot.

Modalità d'esame

La prova finale consiste in una relazione sull'attività di laboratorio (da consegnare prima dell'appello d'esame) ed colloquio orale. Il voto sarà la media delle due prove.