Laboratorio di biologia molecolare (2008/2009)

Obiettivi formativi

L’obiettivo formativo primario del corso è rappresentato dall’apprendimento delle metodologie necessarie allo svolgimento delle più comuni pratiche di manipolazione del DNA. In particolare il corso tratta le principali tecniche di purificazione degli acidi nucleici, la loro separazione mediante elettroforesi, la manipolazione del DNA e le metodologie per clonaggio in vettori batterici.
Nelle esercitazioni pratiche è' prevista l'applicazione delle principali tecniche di purificazione del DNA plasmidico e genomico, la separazione del DNA mediante elettroforesi su gel di agarosio, la sua digestione con enzimi di restrizione, la preparazione di costrutti genici e la loro trasformazione in E. coli.

Teoria:
Il DNA ricombinate. Clonaggio di Geni.
Vettori batterici e non batterici. Librerie genomiche e di cDNA.
Manipolazione degli acidi nucleici. Digestione con endonucleasi di restrizione. Elettroforesi. Ligazione del DNA.
Reazione a Catena della Polimerasi (PCR). Applicazioni
Colutre batteriche. Trasormazione di cellule batteriche ed eucatriotiche.
Produzione di proteine da geni clonati.

Esercitazioni di Laboratorio:
Purificazione di DNA plasmidico
Purificazione di DNA genomico
Purificazione di RNA
Elettroforesi e purificazione del DNA da gel
Digestione con enzimi di restrizione
PCR e ligazione
Trasformazione, colony PCR
Espressione di una proteina ricombinante e analisi gu SDS PAGE.

Relazione sull'attività di laboratorio e colloquio orale